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【飛諾美色譜】色譜小知識(shí)丨高效液相色譜系統(tǒng)常用的檢測(cè)器

高效液相色譜（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）檢測(cè)器作為高效液相色譜儀的重要組成部分之一，它的作用是將流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)定性定量。HPLC檢測(cè)器有多種類型，如何正確選擇檢測(cè)器很重要。由于樣品組分在流通HPLC系統(tǒng)時(shí)會(huì)發(fā)生變化，因此選擇哪種檢測(cè)器主要取決于樣品及其組成成分的性質(zhì)，或者流動(dòng)相和樣品在通過(guò)HPLC系統(tǒng)時(shí)其組成發(fā)生變化的整體性質(zhì)。下面咱們就從幾方面來(lái)簡(jiǎn)單介紹下常用的幾種高效液相色...

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【飛諾美色譜】生物探索 | 不同溫度對(duì)單鏈寡核苷酸分析的影響

治療性寡核苷酸的純化及表征是目前制藥行業(yè)的一大熱點(diǎn)。然而，寡核苷酸的表征，特別是通過(guò)離子對(duì)反相液相色譜（IP-RPLC）進(jìn)行表征，可能會(huì)非常具有挑戰(zhàn)性。治療性寡核苷酸是通過(guò)固相合成制造，也就是核苷酸以特定合成步驟進(jìn)行循環(huán)。因此，我們必須對(duì)n-1和n+1等雜質(zhì)進(jìn)行表征，這其中可能需要大量的方法開(kāi)發(fā)步驟來(lái)進(jìn)行優(yōu)化。此外，我們可能還需要對(duì)其他密切相關(guān)的雜質(zhì)進(jìn)行表征和定量，例如硫代磷酸酯的氧化。另一個(gè)挑戰(zhàn)是在寡核苷酸分析中可能會(huì)觀察到的色譜的變化。保留時(shí)間、峰形和峰面積回收率可能在一...

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在色譜寶庫(kù)里，挖呀挖呀挖——方法開(kāi)發(fā)中流動(dòng)相pH的調(diào)節(jié)

【飛諾美色譜】作為微觀世界探索者，色譜工作者有時(shí)候像一位運(yùn)籌帷幄決勝于千里之外的戰(zhàn)略家，有時(shí)候又像一位謀士，對(duì)微小的“變化”作出嚴(yán)謹(jǐn)縝密的判斷。在方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，pH就是分析勝敗的關(guān)鍵因素，選擇正確或優(yōu)化的pH值往往是致勝關(guān)鍵一步。無(wú)論反相、HILIC還是離子交換模式，樣品和流動(dòng)相的pH值對(duì)于您的分析獲得理想結(jié)果至關(guān)重要。那么，你知道pH的概念是如何產(chǎn)生的嗎？pHpH的概念是丹麥化學(xué)家S.P.L.索倫森在1909年提出的。基本概念：pH是水溶性物質(zhì)的酸度或堿度的量度。更復(fù)雜的...

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【飛諾美色譜】色譜小知識(shí)丨什么是柱外體積？

柱外體積是液相色譜中死體積重要的組成部分，它包括進(jìn)樣器體積，混合器體積，色譜柱前后連接管路的體積，連接配件等所產(chǎn)生的空間，以及檢測(cè)器流通池體積。根據(jù)您使用的系統(tǒng)和應(yīng)用，在HPLC上開(kāi)發(fā)超高性能方法需要優(yōu)化上述配件以減少柱外體積。測(cè)量柱外體積的方法等度法等度方法的系統(tǒng)體積測(cè)量相當(dāng)簡(jiǎn)單，可以直接在系統(tǒng)上進(jìn)行，而無(wú)需更改流動(dòng)相。首先，取出HPLC色譜柱并用零死體積兩通替換色譜柱。然后以固定流速啟動(dòng)HPLC，并在系統(tǒng)中注入少量丙酮或其他有UV吸收組分，并在270nm或220nm處進(jìn)行...

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【飛諾美色譜】色譜小知識(shí)丨反相高效液相色譜法的優(yōu)勢(shì)

高效液相色譜法包括正相色譜和反相色譜兩種，用于分離、定量、鑒定和分析化學(xué)或生物樣品的成分。然而，這兩種方法彼此之間有很大的不同，在大多數(shù)情況下反相HPLC是更好的選擇。在正相HPLC中，樣品的分離是通過(guò)在固定相中使用親水性基團(tuán)（容易溶于水或被水吸收）來(lái)完成的，使極性成分最后被分離出來(lái)。在這種情況下，固定相是極性的，而流動(dòng)相是非極性的。在反相HPLC中正好相反。首先需要去除極性成分，并且在固定相中使用親脂性基團(tuán)（可以溶解在脂質(zhì)、脂肪、油和非極性溶劑中）。在這種情況下，固定相是非...

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